Descripción
Reactivo de transfección de ADN, de baja toxicidad y alta eficiencia
La transfección es el proceso de inserción de material genético, como el ADN y el ARN de doble cadena, en células de mamíferos. Específicamente, la inserción de ADN en una célula permite la expresión o producción de proteínas utilizando la maquinaria propia de la célula. Por otro lado, la inserción de ARN en una célula se utiliza para regular a la baja la producción de una proteína específica al detener la traducción. Si bien el sitio de acción para el ARN transfectado es el citoplasma, el ADN debe transportarse al núcleo para una transfección eficaz. Allí, el ADN se puede expresar de forma transitoria durante un corto período de tiempo o incorporarse al ADN genómico, donde el cambio se transmite de una célula a otra a medida que se divide.
Bioquochem ha optimizado la fórmula del Reactivo de transfección de ADN – TRANS LT (menor toxicidad, mayor eficiencia) para aumentar la eficacia de la transfección y minimizar la toxicidad celular. < / p>
Short Protocol
- – Sembrar células hasta la densidad celular deseada en placas de cultivo (6/12/24/48/96 pocillos) o placas de 60/100 mm
-Deja que los reactivos alcancen la temperatura ambiente antes de usarlos. - 1. Primero, agregue en un tubo X µl de medio (medio + Reactivo A del siguiente paso) debe coincidir con la columna número 4 de la Tabla 1.
2. Luego, agregue en el mismo tubo X µl de Reactivo A. Revuelva la mezcla. No vórtice.
3. Incubar durante 5-15 minutos a temperatura ambiente o 37 ° C. Las incubaciones más largas pueden afectar negativamente a las transfecciones. Esta solución se llama reactivo de transfección diluido.
4. Después de eso, diluya el ADN en el Reactivo Plus y luego agregue X µg de ADN al reactivo de transfección diluido.
5. Incubar durante 10-60 minutos a 37ºC.
6. Después de eso, agregue la mezcla de transfección (ADN + reactivo de transfección diluido) en el medio celular y agite
7. Finalmente, visualice / analice las células transfectadas después de 1-7 días a 37ºC.
