Descripción
Principio del kit de ensayo fluorimétrico Caspasa-9 de Bioquochem
Kit de ensayo Fluorimétrico para Caspasa 9 proporciona un procedimiento sencillo para ensayar la actividad de caspasas que reconocen la secuencia LEHD. En consecuencia, el usuario puede detectar el fluoróforo 7-amino-4-trifluorometilcumarina (AFC), después de la separación del sustrato marcado LEHD-AFC. El rango de longitud de onda de excitación y emisión para monitorizar AFC en un espectrofluorómetro es de 400 nm y 480-520 nm, respectivamente. La comparación de la fluorescencia de AFC de una muestra apoptótica frente a la fluorescencia de control de AFC permite determinar el aumento de veces en la actividad de la caspasa-9.
Información
Las caspasas también se conocen como proteasas cisteína-aspárticas, aspartasas cisteína o proteasas dirigidas a aspartato dependientes de cisteína. Son una familia de enzimas proteasas que desempeñan un papel esencial en la muerte celular programada. Las caspasas tienen la capacidad de escindirse después de los residuos de ácido aspártico.
Hay dos clases de caspasas que implican en la apoptosis; iniciadores (activación por grupo de receptores) y efectores (activación por transición de permeabilidad mitocondrial). Las señales proapoptóticas activan de forma autocatalítica las caspasas del iniciador, como la Caspasa 8 y la Caspasa 9. Como consecuencia, las caspasas del iniciador activado luego procesan las caspasas efectoras, como la Caspasa 3 y la Caspasa 7, que a su vez provocan el colapso celular. Como resumen, las caspasas iniciadoras (caspasa 2, 8, 9 y 10) inician la señal de apoptosis y las caspasas del ejecutor (caspasas 3, 6 y 7) llevan a cabo la proteolisis masiva que conduce a la apoptosis.
La caspasa 9 también se conoce como ICE como la proteasa apoptótica 6 (ICE LAP6), la proteasa apoptótica Mch6 y el factor 3 activador de la proteasa apoptótica (Apaf3)). Específicamente, es un miembro de la familia de peptidasas C14 que contiene un dominio CARD. Es activo como un heterotetrámero y tiene dos isoformas, de acuerdo con la literatura. ProCaspasa 9 es de aproximadamente 47 kD. Está presente en el citosol y, tras la activación, se traslada a las mitocondrias. La caspasa 9 participa en la cascada de activación de la caspasa, responsable de la ejecución de la apoptosis, y corta / activa la caspasa 3 y la caspasa 6. Se activa cuando se la contrata para el complejo Apaf1 / citocromo c.
Kit de ensayo Fluorimétrico para Caspasa 9 se basa en un corto Péptido que contiene secuencias de escisión específicas reconocidas por la caspasa. Como resultado, la caspasa-9 corta el reactivo y libera la sonda de detección colorimétrica o fluorogénica.
